Toxicité aiguë et subaiguë d’Ammi visnaga chez le rat
Référence : Interdisciplinary Toxicology 2019. — PMID 32189984 · DOI 10.2478/intox-2019-0004 Type : etude in vivo · Plante : Ammi visnage · Propriété → Securite & interactions Accès : ⭐ libre (open access) → texte intégral traduit Fidélité : traduction intégrale et fidèle du texte des auteurs. Appels [n] omis ; figures/tableaux « [ ] ».
Résumé
Ammi visnaga (Av) est une source de khelline, où une tisane préparée à partir du fruit de cette plante était utilisée comme médecine à base de plantes contre les calculs rénaux en Égypte. Dans la présente recherche, les études de toxicité aiguë et subaiguë avec une prise orale de 150, 300 et 600 mg/kg d’extrait éthanolique de graines d’Av chez le rat ont été réalisées. Dans le test de toxicité aiguë, 4 groupes de rats (n = 6/groupe : 3 mâles et 3 femelles) ont été choisis et le premier groupe témoin a reçu de l’eau du robinet, tandis que les trois autres groupes ont reçu de l’extrait éthanolique de graines d’Av dissous dans de l’eau du robinet à des doses de 150, 300 et 600 mg/kg, et le comportement général, les effets indésirables et la mortalité ont été enregistrés jusqu’à 14 jours. Dans l’étude de toxicité subaiguë, 72 rats (36 mâles et 36 femelles) ont été répartis en 4 groupes majeurs ; le groupe I a reçu de l’eau du robinet (groupe témoin), tandis que les animaux des groupes II, III et IV (groupes tests) ont reçu une prise orale d’extrait éthanolique de graines d’Av dissous dans de l’eau du robinet à des doses de 150, 300 et 600 mg/kg pc, respectivement. Chacun de ces groupes majeurs a été subdivisé par la suite en 3 sous-groupes (n = 6/groupe : 3 mâles et 3 femelles) où le tissu cérébral, l’échantillon sanguin, les poids du corps et des organes ont été enregistrés au début, puis après deux et quatre semaines de l’expérience pour la détermination des changements hématologiques, biochimiques et histopathologiques dans les tissus (foie, rein, cerveau, rate, cœur, testicule et ovaire). En ce qui concerne la toxicité aiguë, l’extrait éthanolique de graines d’Av n’a induit aucun effet toxique, ni décès, ni toxicité d’organe. Dans l’étude de toxicité subaiguë, la prise orale d’extrait éthanolique de graines d’Av n’a révélé aucun changement des poids du corps et des organes, des paramètres hématologiques, du glucose et du cholestérol sériques, des neurotransmetteurs cérébraux, des fonctions hépatique et rénale, des hormones mâles et femelles. En conclusion, l’extrait éthanolique de graines d’Av est non toxique pour le foie, le rein, le cerveau, la rate, le cœur, le testicule et l’ovaire.
Introduction
Au cours de la dernière décennie, les plantes médicinales représentent une source importante et riche de nouveaux médicaments de synthèse. Un grand nombre des populations mondiales dépendent des plantes médicinales comme thérapie médicamenteuse alternative et complémentaire pour de nombreuses maladies connues. Les utilisations de plantes les plus courantes impliquent l’application d’extraits végétaux, qui contiennent de nombreuses molécules aux effets biologiques bien connus. Les plantes médicinales sont couramment utilisées dans le monde entier sans information sur leurs éventuels effets néfastes ou toxiques ; l’Organisation mondiale de la santé a recommandé que les plantes traditionnelles utilisées pour le traitement des maladies nécessitent des investigations scientifiques supplémentaires sur leurs effets secondaires toxiques. Les plantes médicinales contiennent des ingrédients bioactifs qui agissent comme des mécanismes de défense contre de nombreuses maladies, mais la plante elle-même peut être de nature toxique. Ainsi, les usages médicinaux des herbes ont été restreints par un manque de classification chimique définie, de dose de traitement et de données de toxicité bien connues pour évaluer l’innocuité de la plante. Par conséquent, il est très urgent et important d’évaluer la toxicité des plantes médicinales utilisées dans les applications médicinales et pharmacologiques.
Ammi visnaga (Av) appartient à la famille des Apiacées. Av est médicalement appliquée pour la prévention et le traitement de la lithiase urinaire et, par conséquent, Av représente une application médicale alternative et complémentaire. Av est utilisée en usage médical contre la cristallisation de l’oxalate de calcium dans le rein. C’est une plante à fleurs traditionnellement connue sous de nombreux noms selon les différentes zones de culture, et parmi ces noms, bisnaga et khella ont été utilisés. Elle est cultivée en Afrique du Nord, en Europe et en Asie, mais elle peut être cultivée dans le monde entier. La plante Av est une herbe annuelle atteignant 80 centimètres de hauteur. Les feuilles de la plante mesurent 20 centimètres de long et sont souvent ovales ou parfois de forme triangulaire. L’inflorescence, comme les autres membres de la famille des Apiacées, forme de multiples ombelles de fleurs blanches. Le fruit forme une forme ovale compacte (moins de 3 millimètres de long). La khelline est un constituant principal obtenu à partir d’Av et d’autres espèces d’Ammi, la khelline ayant un effet diurétique. Un autre effet important de la khelline est la relaxation du muscle lisse, mais cette fonction est limitée en raison de ses effets secondaires. Une activité herbicide a été observée et enregistrée pour la khelline et la visnagine, constituants d’Av. Cette activité herbicide de la khelline et de la visnagine n’était pas un effet dépendant de la lumière. La khelline et la visnagine ont toutes deux induit une diminution de l’efficacité photosynthétique, une déstabilisation membranaire, un déclin de la division cellulaire et la mort. La khelline a montré un effet de mortalité très rapide sur les larves de Culex quinquefasciatus à divers stades de développement : ainsi, 18 minutes d’action de la khelline ont induit un taux de mortalité de 54,3 % des larves en 24 heures. Les deux dérivés synthétiques célèbres et médicalement applicables de la khelline sont l’amiodarone et le cromoglycate. Ces deux dérivés synthétiques de la khelline ont moins d’effets secondaires, de sorte qu’ils sont utilisés en médecine moderne. Av contient également de la visnagine comme constituant chimique. En Égypte, une tisane à base de fruit d’Av est célèbrement utilisée comme remède populaire à base de plantes contre les calculs rénaux.
Cette recherche a été conçue pour étudier la toxicité aiguë (détermination de la DL50) et la toxicité subaiguë (changements cliniques, hématologiques, biochimiques et histopathologiques) chez le rat après une administration orale quotidienne d’Ammi visnaga sur une période de 28 jours.
Matériels et méthodes
Matériels
Tous les réactifs de kits utilisés dans cette recherche ont été achetés auprès de Bio-diagnostic Kits reagents via un fournisseur égyptien local, à l’exception des kits de testostérone, de sulfate de déhydroépiandrostérone, de 3β-hydroxystéroïde déshydrogénase, de 17-β-estradiol et d’estradiol-17-β-stéarate qui ont été achetés auprès de Biosource Inc, Belgique. En outre, les réactifs de kits utilisés dans cette recherche incluent les kits de sulfate de déhydroépiandrostérone et de 3β-hydroxystéroïde déshydrogénase qui ont été obtenus auprès de EURO/DPC Ltd., Royaume-Uni, tandis que les réactifs de kits utilisés dans la présente recherche, tels que les kits de 17-β-estradiol et d’estradiol-17-β-stéarate, ont été achetés auprès de Steraloids Inc., USA. Tous les réactifs de kits utilisés dans cette étude ont été fabriqués en 2018.
Matériel végétal
Dans cette recherche, les graines d’Ammi visnaga (Av) ont été livrées par le Département d’horticulture, Ministère de l’Agriculture, Dokki, Le Caire, Égypte. Les graines ont été broyées, pulvérisées et pesées en séquence pour préparer l’extraction.
Préparation de l’extrait éthanolique de graines
Les graines d’Av ont été séchées à l’air dans un four à 40 °C pendant 4 jours, puis les graines sèches ont été coupées et pulvérisées. Les graines séchées (500 g) ont été placées dans 1 000 ml d’eau distillée bouillante et maintenues à température ambiante pendant 15 minutes pour donner une poudre séchée. Ensuite, la poudre séchée a été macérée pendant 7 jours en utilisant de l’éthanol à 70 % comme solvant. Le solvant a ensuite été éliminé par un évaporateur rotatif sous vide, sous pression réduite, pour obtenir l’extrait alcoolique total. L’extrait alcoolique obtenu est lyophilisé et représente un rendement de 15 % des graines sèches extraites. Le processus d’évaporation de l’extrait a été effectué jusqu’à siccité pour donner l’extrait alcoolique total de graines séchées (150 g) selon la méthode de Chopra et al. (1986).
Animaux
Des rats albinos de souches Sprague Dawley (130 ± 10 g, 10 semaines d’âge) des deux sexes ont été obtenus de l’animalerie du National Research Centre, Dokki, Le Caire, Égypte, et ont été maintenus dans des cages en plastique spéciales. Les animaux ont été maintenus sur un régime équilibré commercial et de l’eau du robinet. Les conditions d’animalerie de laboratoire ont été suivies (Guide for the Care and Use of Laboratory Animals, 2011), telles qu’un cycle de 12 heures de lumière / 12 heures d’obscurité, température ambiante = 26–30 °C, humidité = 40–70 %, nombre de rats = 3 rats/une cage et chaque groupe comprenait 2 cages (3 mâles/cage et 3 femelles/cage). La ventilation de la salle des animaux a maintenu la température pour les rats entre 68 et 79 °F et a minimisé les fluctuations de température. Toutes les procédures expérimentales ont été effectuées après l’acceptation du comité d’éthique du National Research Centre et conformément aux recommandations pour les soins et l’utilisation appropriés des animaux de laboratoire (NIH publication n° 85:23 révisée en 1985).
Plan expérimental
Détermination de la DL50 d’Av
Il y a eu 36 rats des deux sexes (18 mâles et 18 femelles) utilisés. La DL50 de l’extrait éthanolique de graines d’Av a été déterminée en mg/kg de poids corporel (pc) pour les rats adultes (Behrens & Karber, 1953), où DL50 = DM − ΣZ.D / m, DM est la dose la plus élevée utilisée, Z est le nombre de rats morts de deux doses successives divisé par deux, D est la différence entre deux doses successives, m est le nombre de rats dans chaque groupe. Les doses choisies pour une telle étude étaient de 5 %, 10 % et 20 % de la DL50 de l’extrait éthanolique de graines d’Av.
Étude de toxicité aiguë
Les animaux ont été répartis en 4 groupes (n = 6 rats/groupe : 3 mâles et 3 femelles) selon la ligne directrice OECD 423 (OECD, 2001). Les rats du groupe témoin ont reçu de l’eau du robinet tandis que les trois autres groupes ont reçu Av dissous dans de l’eau du robinet à des doses de 150, 300 et 600 mg/kg. Les doses ci-dessus ont été sélectionnées sur la base de la DL50 d’Av. Les animaux ont été observés étroitement pendant les 6 premières heures, pour toute manifestation de toxicité, comme l’augmentation de l’activité motrice, la salivation, les convulsions, le coma et la mort. Les animaux ont été sous investigation plus poussée pendant une période de 14 jours et le nombre de rats morts pendant la période d’étude a été noté.
Étude de toxicité subaiguë
Les doses répétées (28 jours) pour les études de toxicité orale ont été réalisées chez le rat selon la ligne directrice de test OECD 407 (OECD, 2008). Soixante-douze rats (36 mâles et 36 femelles) ont été utilisés et répartis en 4 groupes majeurs ; le groupe I a reçu de l’eau du robinet (groupe témoin), tandis que les rats des groupes II, III et IV (groupes tests) ont reçu Av dissous dans de l’eau du robinet à des doses de 150, 300 et 600 mg/kg pc/j, respectivement. Chacun de ces groupes majeurs a été subdivisé par la suite en 3 sous-groupes (n = 6 rats/groupe : 3 mâles et 3 femelles) où le tissu cérébral, l’échantillon sanguin, la consommation alimentaire, la prise d’eau, les poids du corps et des organes ont été mesurés et enregistrés au début, puis après deux et quatre semaines de l’expérience. La dose d’extrait de graines d’Av a été prise quotidiennement par gavage oral dans un volume de 5 ml d’eau du robinet/kg pc/j, une fois par jour pendant 28 jours consécutifs. Tout décès ou signe clinique anormal chez les animaux pendant la période expérimentale a été observé quotidiennement.
Analyse biochimique
La concentration en hémoglobine (Hb) a été déterminée par la méthode décrite par Van Kampen & Zijlstra (1961). La valeur de l’hématocrite (Hct), les globules rouges (GR) et les globules blancs (GB) ont été réalisés selon la méthode de Rodak (1995). Le glucose sérique a été mesuré selon la méthode colorimétrique enzymatique décrite par Trinder (1969). La méthode d’Allain et al. (1974) a été appliquée pour déterminer le cholestérol total sérique, tandis que la méthode de Reitman & Frankel (1957) a été utilisée pour calculer les activités des aspartate et alanine aminotransférases sériques (AST & ALT). La méthode colorimétrique de Kind & King (1954) a été utilisée pour déterminer la phosphatase alcaline sérique (ALP), tandis que la méthode de Walter et Gerard (1970) a été appliquée pour calculer la bilirubine totale sérique. La méthode de Gornall et al. (1949) a été utilisée pour calculer les protéines totales sériques, tandis que la méthode de Drupt (1974) a été utilisée pour estimer l’albumine sérique. La méthode enzymatique de Patton & Crouch (1977) a été appliquée pour estimer l’urée sérique, tandis que la méthode cinétique de Houot (1985) a été utilisée pour calculer la créatinine sérique. La méthode de Kabasakalian et al. (1973) a été appliquée pour déterminer l’acide urique sérique, tandis que la méthode de Ciarlone & Smudski (1977) a été utilisée pour estimer la sérotonine (5-hydroxytryptamine ; 5-HT), la norépinéphrine (NE) et la dopamine (DA) dans le cortex cérébral. La méthode de Maruyama et al. (1987) a été appliquée pour estimer les concentrations sériques de testostérone (Ts) et de sulfate de déhydroépiandrostérone (DHEA-SO4). La méthode de Talalay (1962) a été appliquée pour déterminer le niveau sérique de 3β-hydroxystéroïde déshydrogénase (3βHSD), tandis que la méthode de Vihma et al. (2001) a été utilisée pour estimer les niveaux sériques de 17-β-estradiol (17β-E) et d’estradiol-17-β-stéarate (E-17β-s).
Investigation histopathologique
Des échantillons de tissus de cerveau, foie, rein, rate, cœur et ovaire ont été fixés dans une solution de formol neutre à 10 % tandis que les tissus des testicules ont été fixés dans le liquide de Bouin, puis traités pour un enrobage de routine dans la paraffine. Les blocs ont été sectionnés à une épaisseur de 5 μm et colorés à l’hématoxyline et à l’éosine pour un examen histopathologique au microscope à la recherche de tout dommage cellulaire ou changement de morphologie de ce tissu particulier.
Analyse statistique
Les résultats obtenus dans cette recherche ont été tabulés en tant que moyenne ± erreur type de la moyenne (SEM). Les variances entre les différents groupes ont été évaluées par ANOVA à l’aide du logiciel SPSS 13 pour Windows, suivie d’un test post-hoc. Les comparaisons inter-groupes ont été effectuées à l’aide du test de la plus petite différence significative (Tukey) ; signification à p ≤ 0,05.
RÉSULTATS
La DL50 d’Av
La DL50 d’Av était égale à 3 000 mg/kg de poids corporel, de sorte que 5 %, 10 % et 20 % de la DL50 de l’extrait de graines d’Av équivalent à 150, 300 et 600 mg/kg, respectivement.
Étude de toxicité aiguë
L’extrait de graines d’Av administré à des doses de 150, 300 et 600 mg/kg pc/j respectivement par gavage oral chez des rats mâles et femelles normaux n’a induit aucun décès ni symptôme toxique chez les rats traités. Tous les animaux étaient normaux tout au long de l’étude et ont survécu jusqu’à la fin de la période expérimentale de 14 jours.
Étude de toxicité subaiguë
Observations générales
Aucune mortalité ni changement clinique n’ont été observés chez les mâles et les femelles pendant le test. Les animaux mâles et femelles n’ont révélé aucune perturbation du comportement animal ni d’autres activités physiologiques.
Consommation alimentaire et prise d’eau
Aucune différence de consommation alimentaire et de prise d’eau n’a été trouvée entre les rats témoins et traités tout au long de la période de 28 jours.
Poids du corps et des organes
De légers changements ont été observés dans les poids du corps et des organes des animaux chez tous les animaux traités par Av en comparaison avec les rats témoins après 28 jours consécutifs de prise orale d’Av.
Paramètres hématologiques, glucose et cholestérol sériques
Il était évident que l’extrait de graines d’Av n’a induit aucun changement de l’Hb, de l’Hct, des GR, des GB, du glucose sérique et du cholestérol total chez tous les animaux traités par rapport au groupe témoin après 28 jours de période d’étude (voir [ ]).
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Fonction hépatique
Il était clair que l’extrait de graines d’Av n’a induit aucun changement de l’AST, de l’ALT, de l’ALP, de la bilirubine totale, des protéines totales et de l’albumine sériques chez tous les animaux traités par rapport au groupe témoin après 28 jours de période d’étude (voir [ ]).
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Fonction rénale et neurotransmetteurs du cortex cérébral
Il était observable que l’extrait de graines d’Av n’a induit aucun changement de l’urée, de la créatinine et de l’acide urique sériques, ainsi que de la sérotonine, de la norépinéphrine et de la dopamine tissulaires chez tous les animaux traités par rapport au groupe témoin après 28 jours de période d’étude (voir [ ]).
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Hormones mâles et femelles
Il est clair que l’extrait de graines d’Av n’a induit aucun changement des activités sériques de Ts, DHEA-SO4, 3βHSD, 17β-E et E-17β-s chez les animaux mâles et femelles traités par rapport au groupe témoin après 28 jours de période d’étude (voir [ ]).
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Résultats histopathologiques
La structure histologique du foie chez tous les rats traités était comparable au schéma normal de l’organe chez les témoins ([ ]). Aucun changement de l’architecture lobulaire hépatique et des hépatocytes n’a été observé ([ ]).
[ ] La structure histologique du rein chez tous les rats traités était comparable au schéma normal de l’organe chez les témoins ([ ]). Aucun changement des glomérules et de l’architecture des tubules rénaux n’a été détecté ([ ]).
[ ] La structure histologique du cerveau chez tous les rats traités était comparable au schéma normal de l’organe chez les témoins ([ ]). Aucun changement de l’architecture normale de la structure cérébrale n’a été identifié ([ ]).
[ ] La structure histologique de la rate chez tous les rats traités était comparable au schéma normal de l’organe chez les témoins ([ ]). Aucun changement au sein des macrophages de la pulpe rouge, avec une architecture structurale normale, n’a été trouvé ([ ]).
[ ] La structure histologique du cœur chez tous les rats traités était comparable au schéma normal de l’organe chez les témoins ([ ]). Aucun changement des fibres musculaires cardiaques, du cytoplasme acidophile et des noyaux situés centralement n’a été observé ([ ]).
[ ] La structure histologique du testicule chez tous les rats traités était comparable au schéma normal de l’organe chez les témoins ([ ]). Aucun changement des tubules séminifères et de l’architecture des cellules germinales n’a été identifié ([ ]).
[ ] La structure histologique de l’ovaire chez tous les rats traités était comparable au schéma normal de l’organe chez les témoins ([ ]). Aucun changement de l’architecture des petits follicules et des grands follicules n’a été rapporté ([ ]).
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Discussion
Les plantes médicinales prises par voie orale sans dose ordinaire, en corrélation avec un manque de recherche scientifique suffisante sur leur sécurité médicale, attirent davantage l’attention concernant leur toxicité. Il n’existe aucune étude publiée sur les données toxicologiques d’Av après une exposition subaiguë de son extrait de graines.
Dans l’étude de toxicité aiguë, l’administration orale de l’extrait éthanolique de graines d’Av à 150, 300 et 600 mg/kg pc/j respectivement n’a montré aucun effet toxique observable chez les rats en termes de décès ou de symptômes anormaux, ce qui indique qu’il est non toxique et sûr chez le rat. Dans la recherche de toxicité subaiguë, les animaux qui ont été administrés par voie orale avec 150, 300 et 600 mg/kg pc/j respectivement d’Av pendant 28 jours n’ont montré aucune mortalité, aucun changement de poids du corps et des organes, ni de changement biochimique ou histopathologique dans les organes des animaux tels que le foie, le rein, la rate, le cœur et le testicule, ce qui soutient le protocole de sécurité de l’extrait de graines d’Av. La recherche subaiguë n’a révélé aucun changement biochimique dans le foie, le rein, le cerveau, le cœur, la rate, le testicule et l’ovaire chez les rats mâles et femelles après une prise orale de 600 mg/kg pc/j d’extrait éthanolique de graines d’Av pendant 28 jours consécutifs. Le système hématopoïétique / la moelle osseuse est l’une des cibles les plus sensibles pour tout composé ou médicament toxique et c’est un guide important de tout changement physiologique et pathologique chez l’homme comme chez l’animal. Dans la recherche subaiguë, les paramètres hématologiques sont associés à des résultats toxiques puisque toute variation du système hématologique est un indice sensible de toute toxicité humaine si les données obtenues à partir d’études animales sont transposées. L’étude subaiguë des animaux mâles et femelles avec une prise orale quotidienne d’extrait de graines d’Av pendant 28 jours consécutifs a montré de petites ou mineures variations de certains paramètres biochimiques et hématologiques.
Le principal organe du métabolisme, y compris des médicaments, est le foie. Le tissu hépatique est un lieu d’élimination ou de dégradation du cholestérol et, en même temps, le foie est un lieu principal de synthèse du cholestérol. Dans cette explication, le foie contrôle la synthèse du glucose et augmente la libération de glucose libre à partir des réserves de glycogène hépatique. Des variations mineures ont été enregistrées à la fois dans les niveaux de glucose et de cholestérol dans cette recherche. Par conséquent, l’extrait éthanolique de graines d’Av a eu un effet mineur sur le métabolisme des lipides et des glucides chez les animaux mâles et femelles. En outre, les médicaments présentant une quelconque toxicité affectent les transaminases aspartate aminotransférase (AST) et alanine aminotransférase (ALT) dans le foie, qui sont des enzymes bien connues utilisées comme bons indicateurs de la fonction hépatique et comme biomarqueurs prédisant une éventuelle toxicité. L’élévation ou l’augmentation des activités des enzymes sériques AST et ALT indique la destruction survenant dans le tissu / les cellules hépatiques parenchymateuses. Dans cette recherche, les niveaux sériques d’AST et d’ALT n’ont révélé aucune variation liée à une augmentation, même à la dose la plus élevée (600 mg/kg pc/j) d’extrait de graines d’Av par rapport au groupe témoin. L’AST sérique provient à l’origine du cytoplasme et des mitochondries et, par conséquent, toute variance du niveau d’AST donne une indication de destruction hépatique conduisant à la libération d’AST du foie dans le sérum. Ainsi, l’absence d’augmentations observées des enzymes hépatiques AST et ALT soutient les preuves selon lesquelles l’administration subaiguë de l’extrait éthanolique de graines d’Av n’a induit aucun changement dans les cellules ou le métabolisme hépatiques chez les animaux mâles et femelles.
L’extrait éthanolique de graines d’Av n’a montré aucune altération histopathologique dans les tissus hépatique, néphrotique et splénique, ce qui indique aucun effet observable sur le système réticulo-endothélial. L’extrait éthanolique de graines d’Av n’a montré aucune variance observable dans le poids des organes ou la couleur des organes ni affecté les changements histopathologiques dans des organes comme le cœur, le cerveau, le testicule et l’ovaire, indiquant des effets toxiques croissants minimaux sur les tissus reproducteur, cardiaque et cérébral.
Enfin, aucune altération observable ne s’est produite dans les paramètres de la fonction rénale, représentés par aucune variance des niveaux sériques d’urée, de créatinine et d’acide urique ainsi qu’aucun changement histologique dans les tissus néphrotiques traités par l’extrait éthanolique de graines d’Av.
Conclusion
L’étude fournit des données précieuses sur les effets aigus et subaigus d’Ammi visnaga chez les rats mâles et femelles. Les doses de 5, 10 et 20 % correspondant à 150, 300 et 600 mg/kg pc/j d’Av n’ont provoqué aucune mortalité ni effet toxique dans l’étude de toxicité aiguë chez le rat. Aucun changement clinique, hématologique, biochimique, histopathologique significatif ni changement des niveaux de certaines hormones n’a été observé chez les animaux traités par rapport aux témoins dans l’étude de toxicité orale de 28 jours.
Déclaration de conflit d’intérêts
Les auteurs déclarent qu’il n’y a aucun conflit d’intérêts.